主要技术内容
3 原理
黄酮类化合物由于自身结构特征,可在?360nm?波长附近产生最大吸收,在一定浓度范围内,其浓度与吸光度符合朗伯比尔定律。与芦丁标准品比较,进行待测物中总黄酮的定量测定。
4 试剂和材料
4.1 试剂
4.1.1 芦丁(C27H30O16)标准品(含量≥97 %)。
4.1.2 无水乙醇:分析纯。
4.1.3 甲醇:分析纯。
4.2 标准溶液配制
4.2.1 芦丁标准储备溶液
称取?25 mg(精确至?0.1 mg)芦丁,加甲醇溶解并定容至?25 mL,得?1mg/mL?标准储备溶液。
4.2.2 芦丁标准中间溶液
吸取芦丁标准储备溶液?2.5 mL,加甲醇溶解并定容至?100mL,得?25 μg/mL?标准工作溶液。
5 仪器和设备
5.1 天平:感量为?0.1mg。
5.2 超声波清洗器。
5.3 紫外分光光度计。
6 分析步骤
6.1 试样制备
称取?1g(精确至?0.1 mg)的试样至?25ml?容量瓶中,用乙醇定容,摇匀后,超声提取?20min,室温静置?30min。
6.2标准工作曲线
准确吸取芦丁标准中间溶液?1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL?分别置于?25mL?比色管中,加甲醇至刻度,摇匀,配置成浓度为?1.0μg/mL、2.0μg/mL、3.0μg/mL、4.0μg/mL、5.0μg/mL?系列标准溶液,用?1cm?比色皿,以甲醇调节零点,于波长?360nm?处测定其吸光度值。以浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。
6.3 试样的测定
吸取上述提取液?1.0mL?于?25mL?比色管中,加甲醇至刻度,摇匀,用?1cm?比色皿,以甲醇调节零点,于波长?360nm?处测定吸光度。同时做试剂空白。
7分析结果的表述
试样中总黄酮含量(以芦丁计)按公式(1)进行计算。
C×V×F×100
X = ----------------
M×1000 ………………………(1)
式中:
X───试样中总黄酮含量(以芦丁计),单位为毫克每百克(mg/100 g);
C───试样提取液中被测总黄酮含量(以芦丁计),单位为微克每毫升(μg/mL);
M───试样质量,单位为克(g);
F───提取液稀释倍数;
V ───试样定容体积,单位为毫升(mL); 计算结果保留小数点后两位。
8 精密度
在重复条件下,获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的?10 %。
适用范围
本文件规定了刺梨汁中总黄酮含量(以芦丁计)测定的紫外分光光度法。
本文件适用于刺梨原汁、浓缩汁中总黄酮含量的测定。
本文件总黄酮的检出限:0.63? mg/100?g;定量限:7.0? mg/100? g。
是否包含专利
否