主要技术内容
4 原理
试样中的乳铁蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白经酶解作用水解成特征性肽段，以液相色谱-串联质谱法测定目标蛋白的特征性肽段，基质匹配标准曲线外标法定量，计算试样中乳铁蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的含量。
5 试剂或材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯。
5.1 试剂
5.1.1
水：GB/T 6682，一级水。
5.1.2
碳酸氢铵。
5.1.3
二硫苏糖醇。
5.1.4
碘代乙酰胺。
5.1.5
乙酸。
5.1.6
胰蛋白酶：序列分析纯，活力单位≥4 500 U/mg，或性能相当者。
5.1.7
甲酸：色谱纯。
5.1.8
乙腈：色谱纯。
5.1.9
鸡蛋蛋清粉：食品级。
5.2 试剂配制
5.2.1
碳酸氢铵溶液（100 mmol/L）：称取0.79 g碳酸氢铵，用水溶解后稀释至100 mL。
5.2.2
二硫苏糖醇溶液（500 mmol/L）：称取0.771 g二硫苏糖醇，用碳酸氢铵溶液（100 mmol/L）溶解后定容至10 mL。
5.2.3
碘代乙酰胺溶液（500 mmol/L）：称取0.925 g碘代乙酰胺，用碳酸氢铵溶液（100 mmol/L）溶解后定容至10 mL。
5.2.4
乙酸溶液（1 %）：吸取0.1 mL乙酸，用水稀释并定容至10 mL。
5.2.5
胰蛋白酶溶液（100 μg/mL）：称取1 mg胰蛋白酶，用乙酸溶液（1 %）溶解后稀释至10 mL，现用现配。
5.2.6
甲酸溶液（0.1 %）：吸取1.0 mL甲酸，用水稀释并定容至1 000 mL。
5.2.7
甲酸乙腈溶液（0.1%）：吸取1.0 mL甲酸，加入乙腈稀释并定容至1 000 mL。
5.2.8
空白基质溶液：称取0.10 g鸡蛋蛋清粉，用水定容至50 mL备用。
5.3 标准品
5.3.1
乳铁蛋白标准品（CAS号：146897-68-9）：纯度≥95%，铁含量≤35 mg/100g，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。
5.3.2
α-乳白蛋白标准品（CAS号：9051-29-0）：纯度≥95%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。
5.3.3
β-乳球蛋白标准品（CAS号：9045-23-2）：纯度≥95%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。
5.4 标准溶液配制
5.4.1
乳铁蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白标准储备液（1 mg/mL）：分别称取10.0 mg乳铁蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白标准品，用水定容至10 mL。混匀，0~4 ℃下保存，可保存3个月。
5.4.2
混合标准中间液（200 μg/mL）：分别准确移取2.0 mL的乳铁蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白标准储备液于10 mL容量瓶中，用空白基质溶液稀释至10 mL，现用现配。
5.4.3
标准系列工作液：吸取适量的混合标准中间液，用空白基质溶液逐级稀释至1.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、50.0 μg/mL、100.0 μg/mL和200.0 μg/mL标准系列工作液，现用现配。
5.5 材料
5.5.1
1.5 mL离心管：聚丙烯材质。
5.5.2
50 mL离心管：聚丙烯材质。
5.5.3
水相微孔滤膜：0.22 μm，聚醚砜材质。
6 仪器和设备
6.1
液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源。
6.2
天平：感量0.01 g和0.01 mg。
6.3
冷冻离心机：转速≥10 000 r/min。
6.4
涡旋混合仪。
6.5
超声波仪。
6.6
恒温振荡箱或恒温振荡水浴锅。
适用范围
本文件规定了生牛乳中乳铁蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的液相色谱-串联质谱测定方法。
本文件适用于生牛乳中乳铁蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的测定。
是否包含专利
否
