主要技术内容
5 试验环境及材料要求
5.1 试验环境
本方法使用的细胞培养洁净室应符合GB/T 42398-2023要求。环境温度应控制在22 ℃±4 ℃，湿度应控制在45%～65%；洁净区与非洁净区之间、不同空气洁净度的洁净区之间的压差应＞10 Pa；洁净区内不同功能及级别房间之间宜保持适当的压差梯度，以防止污染和交叉污染；总送风量中（非单向流）应有10%～30%的新风量；噪声级（空态）应 ≤ 65 dB(A)；照明的照度值宜 ＞ 300 lx。
5.2 细胞
选用永生化人角质形成细胞，宜采用ATCC 细胞资源库或ECACC 细胞资源库来源的细胞株。细胞应无细菌、真菌、支原体等外源因子污染。
5.3 仪器和设备
5.4 试剂
5.5 耗材
5.6 试剂准备
6 试验方法
6.1 基本要求
所有溶液、玻璃器皿、吸头等都应无菌，所有操作洁净环境下进行。
6.2 细胞准备
6.3 细胞培养条件
6.4 受试样品
6.4.1 受试样品的制备
6.5 受试样品浓度确定
6.6 IL-6表达检测
6.6.1 细胞处理
6.6.2 ELISA 检测IL-6表达
取 500 μL 细胞培养上清至 1.5 mL 无菌离心管中进行 IL-6 含量检测。ELISA 检测按照 IL-6 ELISA 检测试剂盒的操作说明书进行。
7 结果计算
7.1 IL-6浓度计算
以ELISA 检测所得的 OD450 值为横坐标、标准品浓度为纵坐标绘制标准曲线。根据受试样本的 OD450 值，计算获得相应的 IL-6 浓度，取 3 个受试复孔的平均值作为受试样本 IL-6 表达水平。
7.2 结果分析
7.2.1 实验有效性判定
7.2.2 试验结果分析
8 试验报告
适用范围
本文件规定了化妆品或其原料潜在的舒缓功效的一种测试方法——体外皮肤角质形成细胞炎症因子测试法。该方法的测试结果可作为化妆品或其原料是否具有舒缓功效的佐证依据之一。
本文件适用于通过由外部刺激引起的炎症反应通路而达到舒缓效果的受试样品的测试
是否包含专利
否
