主要技术内容
3 原理
本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的吡虫啉经提取后与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和试纸条中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与质控线（C线）颜色深浅比较，对样品中吡虫啉进行定性判定。
4 试剂与材料
4.1 试剂
除另有说明外，所有试剂均为分析纯，实验室用水应符合GB/T 6682中二级水的要求。
4.1.1 甲醇（CH3OH）。
4.1.2 参考物质：吡虫啉参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1，纯度≥98%。
表1 吡虫啉参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量
中文名称 英文名称 CAS登录号 分子式 相对分子质量
吡虫啉 Imidacloprid 138261-41-3 C9H10ClN5O2 255.7
注：或等同可溯源物质。
4.2 溶液配制
4.2.1 吡虫啉标准储备液（100 μg/mL）：准确称取吡虫啉参考物质（4.1.2）1 mg，置于10 mL容量瓶中，用甲醇（4.1.1）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为100 μg/mL的吡虫啉标准储备液。4℃避光保存，有效期6个月。
4.2.2 吡虫啉标准工作液（1 μg/mL）：精密移取吡虫啉标准储备液（100 μg/mL）（4.2.1）0.1 mL，置于10 mL容量瓶中，用甲醇（4.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1 μg/mL的吡虫啉标准工作液。临用新配。
4.3 材料
吡虫啉胶体金免疫层析试纸条，适用基质为生乳。需在阴凉、干燥、避光条件下保存。
4.3.1 金标微孔（含胶体金标记的特异性抗体）。
4.3.2 试纸条。
5 仪器与设备
5.1 电子天平：感量为0.01 g。
5.2 移液器：10 μL~200 μL、100 μL~1000 μL。
5.3 迷你金属浴。
6 分析步骤
6.1 试样制备
取适量有代表性样品充分混匀。
6.2 试样提取
以生乳为基质的样品可直接上样检测或根据产品说明书稀释后检测。
6.3 测定步骤
吸取200 μL样品待测液于金标微孔（4.3.1）中，抽吸5~10次使混合均匀，35℃温育5 min，将检测试纸条（4.3.2）样品端垂直向下插入金标微孔中，35℃温育5 min，取出试纸条，对结果进行判定。
注1：测定步骤建议按照试纸条说明书。
注2：结果判定建议使用读数仪，读数仪的具体使用参照仪器使用说明书。
6.4 质控试验
每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。
6.4.1 空白试验
称取空白试样，按照6.2和6.3步骤与样品同法操作。
6.4.2 加标质控试验
准确移取空白试样1.9 mL放入离心管中，加入0.1 mL吡虫啉标准工作液（1 μg/mL）（4.2.2），使试样中吡虫啉浓度为50 μg/L，按照6.2和6.3步骤与样品同法操作。
7 结果判定
7.1 读数仪测定
按读数仪说明书要求操作，直接读数并进行结果判定。
7.2 目视判定
通过对比质控线（C线）和检测线（T线）的颜色深浅进行结果判定。目视判定示意图见图1。
7.2.1 无效
质控线（C线）不显色，无论检测线（T线）是否显色，表明操作不正确或试纸条已失效，检测结果无效。
7.2.2 阳性结果
质控线（C线）显色，检测线（T线）不显色或颜色浅于质控线（C线），表明样品中吡虫啉含量高于方法检出限，判定为阳性。
7.2.3 阴性结果
质控线（C线）显色，检测线（T线）颜色深于质控线（C线）或与质控线（C线）颜色基本一致，表明样品中吡虫啉含量低于方法检出限，判定为阴性。
图1 目视判定示意图
7.3 质控试验要求
空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。
8 结果确认
当检测结果为阳性时，应按照GB 2763指定方法标准进行确证。
9 性能指标
9.1 检出限：50 μg/L。
9.2 灵敏度：≥95%。
9.3 特异性：≥90%。
9.4 假阴性率：≤5%。
9.5 假阳性率：≤10%。
注：性能指标计算方法见附录A。
10 其他
本方法所述试剂、试纸条信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不做限定。方法使用者应使用经过验证的满足本方法规定的各项性能指标的试剂、试纸条。
适用范围
本方法规定了生乳中吡虫啉的胶体金免疫层析快速检测方法。
本方法适用于生乳中吡虫啉的快速测定。
是否包含专利
否
