主要技术内容
4 方法原理
在碱性条件下利用多酚的还原性,多酚可以将磷钨酸钼酸还原成蓝色,蓝色深浅与多酚含量成正相关,在760 nm下测定吸光度值,外标法定量。
5 试剂
5.1 试剂
除另有规定外,仅使用分析纯试剂和GB/T 6682规定的一级水。
5.1.1 没食子酸(C7H6O5,CAS:149-91-7)标准品:纯度 ≥ 98%。
5.1.2 无水乙醇(C2H6O)。
5.1.3 碳酸钠(Na2CO3)。
5.1.4 福林酚试剂(Folin-Phenol,BR,1 mol/L)。
5.2 试剂配制
5.2.1 没食子酸对照品储备液(0.1 mg/mL):精密称取10 mg(精确至0.1 mg)没食子酸标准品,加入少量水溶解,转移至100 mL棕色容量瓶中,加水定容至刻度,摇匀,4 ℃避光保存。
5.2.2 没食子酸标准系列浓度溶液:准确量取没食子酸对照品储备液(5.2.1)0.0 mL、0.25 mL、0.50 mL、0.75 mL、1.00 mL、1.25 mL、1.5 mL于25 mL棕色容量瓶中,用水定容至刻度,摇匀,4 ℃保存。没食子酸标准系列浓度为0 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、3.0 μg/mL、4.0 μg/mL、5.0 μg/mL、6.0 μg/mL。现用现配。
5.2.3 12%碳酸钠溶液:称取无水碳酸钠12 g(精确至0.01 g),加适量水溶解,转移至100 mL容量瓶中,加水定容至刻度,摇匀。
5.2.4 80%乙醇提取剂:量取无水乙醇80 mL,置100 mL容量瓶中,加水溶解并定容至刻度。
6 仪器和设备
6.1 分光光度计。
6.2 高速破壁机。
6.3 超声波提取器。
6.4 高速冷冻离心机:转速10000 rpm。
6.5 分析天平:感量0.0001 g。
6.6 涡旋振荡器。
6.7 组织捣碎机。
7 分析步骤
7.1 试样制备
将刺梨鲜果(3.1)刺梨鲜果去皮、去籽,组织捣碎机打浆,混合均匀,备用;去除刺梨果干(3.2)和刺梨果脯(3.3)中可见杂质,用高速破壁机粉碎,将其制成粉状,备用;刺梨冻干粉(3.4)和刺梨喷干粉(3.5)研磨均匀备用。
7.2 试样提取
7.2.1 固态试样:
取7.1样品0.5 ~ 2 g,精密称定(精确到0.0001 g),置50 mL具塞离心管内,加5 mL水浸润样品,加80%乙醇溶液30 mL超声处理90分钟,超声过程中振摇数次,保持固相完全分散。超声结束后离心(9000 rmp、4 ℃)5分钟,滤过,用水洗涤沉淀物,合并洗液及滤液,加水定容至50 mL容量瓶,即得。
7.2.2 液态试样:
刺梨原汁(3.6)、刺梨浓缩汁(3.7)等液体样品,精密量取样品1~10 mL,置50 mL具塞离心管内,加80%乙醇溶液30 mL超声处理90分钟。超声结束后离心(9000 rmp、4 ℃)5分钟,滤过,用水洗涤沉淀物,合并洗液及滤液,加水定容至50 mL容量瓶,即得。
7.3 标准工作曲线
准确量取没食子酸标准系列浓度溶液(5.2.2)1.0 mL于25 mL刻度试管中,加1.0 mol/L Folin-Phenol试剂1.0 mL,摇匀后静置5分钟,再加入12%碳酸钠溶液(5.2.3)2.0 mL,加水定容至刻度线,30℃水浴加热90分钟,在760 nm处测定吸光度。以25 mL溶液中没食子酸质量(mg)为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。
7.4 空白试验
与试样的测定平行进行,取相同量的所有试剂,采用相同的分析步骤,但不添加试样。
7.5 试样的测定
准确量取提取液(7.2)1 mL,置于25 mL刻度试管中,加入1.0 mol/L Folin-Phenol试剂1.0 mL,再加入12%的碳酸钠溶液(5.2.3)2.0 mL,加水定容至刻度线,30 ℃水浴加热90分钟,在760 nm处测定吸光度。
若样品多酚含量较高(吸光度不在0.1~0.8之间),可适当稀释后再进行分析测定。
8 分析结果的表述
8.1 刺梨鲜果、刺梨干果等固态试样
试样中总酚含量(以没食子酸计)以百分含量(%)表示,按公式(1)进行计算。
x = ……………………(1)
式中:
x───试样中总酚含量(以没食子酸计);
m───由标准曲线查出的样品中没食子酸质量,单位为毫克(mg);
M───试样质量,单位为克(g);
d───样品稀释倍数;
计算结果保留小数点后两位。
8.2 刺梨原汁、刺梨浓缩汁等液态试样
样品中总酚含量(以没食子酸计)以百分含量(%)表示,按式(2)计算:
x = ……………………(2)
式中:
x───试样中总酚含量(以没食子酸计);
m───由标准曲线查出的样品中没食子酸质量,单位为毫克(mg);
v───试样体积,单位为毫升(mL);
d───样品稀释倍数;
计算结果保留小数点后两位。
9 精密度
在重复条件下,获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。
适用范围
本标准规定了刺梨及其制品中总酚含量测定的紫外分光光度法。
本标准适用于刺梨鲜果、刺梨干果、刺梨果脯、刺梨冻干粉、刺梨喷干粉、刺梨原汁、刺梨浓缩汁等刺梨及其制品中总酚含量的测定。
是否包含专利
否