主要技术内容
1 范围
本文件规定了酒醅中淀粉测定的术语和定义、方法原理、试剂和材料、仪器设备、分析步骤、结果计算及精密度等。
本文件适用于酒醅中淀粉的测定。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
酒醅
已经发酵完毕等待配料、蒸馏的物料。
3.2
淀粉
是高分子碳水化合物，是由葡萄糖分子聚合而成的多糖。
注：其为白酒酿造的核心原料，其含量及质量直接影响酒的品质。
4 方法原理
在弱酸性条件下，试液中的淀粉与淀粉酶水解产生的还原糖与DNS试剂反应，生成红棕色络合物，在波长为540 nm处，以试剂空白作参比，用比色皿比色，测定其吸光度。
5 试剂和材料
除非另有说明，本文件所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的三级水。
5.1试剂
5.1.1 淀粉酶（CAS号：9000-90-2）。
5.1.2 糖化酶（CAS号：9032-08-0）。
5.1.3 氢氧化钠 （NaOH，CAS号：1310-73-2）。
5.1.4 盐酸（HCl，CAS号：7647-01-0）
5.1.5 3,5-二硝基水杨酸（C7H4N2O7， CAS号：609-99-4）
5.1.6 酒石酸钾钠（C4H4O6KNa·4H2O，CAS号：6381-59-5）
5.1.7 苯酚（C6H5OH，CAS号：108-95-2）
5.1.8 亚硫酸钠（NaSO3.7H2O，CAS号：10102-15-5）
5.1.9 葡萄糖标准品（C6H12O6，CAS号：50-99-7），纯度≥99.0%。
5.2溶液配制
5.2.1 淀粉酶溶液（10 g/L）：称取1 g淀粉酶，溶于100 mL水中，离心，取上清液，2℃~6℃冰箱保存，有效期7 d。
5.2.2 糖化酶溶液 （2.5 g/L）：称取 0.25 g糖化酶，溶于100 mL水中，离心，取上清液，2℃~6℃冰箱保存，有效期7 d。
5.2.3 氢氧化钠（0.1 mol/L）：称取 0.04 g氢氧化钠，溶于100 mL水。
5.2.4 氢氧化钠（2 mol/L）：称取 40 g氢氧化钠，溶于500 mL水。
5.2.5 盐酸（0.1 mol/L）：量取1 mL盐酸，加水稀释定容至100 mL。
5.2.6 DNS溶液（6.3g/L）：称6.3 g 3,5-二硝基水杨酸，量取 2 mol/L氢氧化钠溶液 262 mL，加入500 mL含有182 g酒石酸钾钠的热水溶液中溶解，溶解完全后，加入5 g苯酚、5 g亚硫酸钠，搅拌至全部溶解，冷却后加水定容至1 L，放置在棕色瓶中，7 d后备用。
5.2.7 葡萄糖标准溶液 （1 mg/mL）：称取预先经100 ℃~105 ℃干燥恒重的无水葡萄糖0.1 g（精确至0.0001 g），用水溶解后定容至100 mL，摇匀备用。
6 仪器设备
6.1 分光光度计，采用1 cm比色皿。
6.2 分析天平，感量为0.001 g和0.0001 g。
6.3 离心机。
6.4 研磨装置。
6.5 恒温干燥箱。
6.6 水浴锅。
6.7 pH计。
6.8 样品筛，100目。
7 操作步骤
7.1 样品制备
取具有代表性的酒醅样品1kg，混合均匀后缩分法取样5g~10g。置于60℃恒温干燥箱中，干燥至含水率20%以下，去除稻壳等其他杂质后磨匀至细粉，过100 目筛子，备用。
7.2试液的制备
称取0.1g（精确至0.001g）试样于25mL试管中，加5mL水，用氢氧化钠溶液（5.2.3）或盐酸溶液（5.2.5）调节pH至4~5，沸水浴加热15min。冷却至60℃，加入淀粉酶溶液（5.2.1）10mL，放置 60℃水浴中酶解，每次取1滴酶解液加入1滴碘液，至不显蓝色即可。将酶解液转移至50 mL离心管中，用水清洗2-3次试管，洗液并入离心管，用水定容至50 mL，4000 r/min离心5 min或过滤。取上述淀粉酶酶解液0.5 mL置于10 mL比色管，加入糖化酶溶液（5.2.2）0.5 mL，置于60 ℃水浴中加热30 min，备用。同时做样品空白试验。
7.3标准曲线的制作
准确吸取葡萄糖标准溶液（5.2.7）0.00 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL、1.00 mL分别置于10 mL比色管中，加2 mLDNS溶液（5.2.6），混匀，置于沸水浴中加热5 min，取出冷却至室温，用水定容至10 mL，混匀，比色管中溶液质量浓度分别为0.0 mg/mL、0.2 mg/mL、0.4 mg/mL、0.6 mg/mL、0.8 mg/mL、1.0 mg/mL，静置10 min，用1 cm比色皿，以试剂空白作参比，在540 nm处测定其吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
7.4 试液的测定
向7.2的试样酶解液和空白酶解液中分别加入2 mL DNS溶液（5.2.6），混匀，置于沸水浴中加热5min，取出冷却至室温，用水定容至10 mL，混匀，静置10 min，用1 cm比色皿，以试剂空白作参比，在540 nm处测定其吸光度。
8 结果计算
试样中淀粉含量按公式（1）计算。
（1）
式中：
X—样品中淀粉含量，单位为%；
C—试样测试液中葡萄糖的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；
C0—空白测试液中葡萄糖的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；
V1—试样淀粉酶解液的定容体积，mL；
V2—测定用试样淀粉酶解液的体积，mL；
m—试样的质量，单位为克（g）；
0.9—葡萄糖折算成淀粉的换算系数。
注：计算结果保留到小数点后两位。
9 精密度
在重复性条件下两次独立测定结果绝对差值不得超过算术平均值的5%。
适用范围
本文件规定了酒醅中淀粉测定的术语和定义、方法原理、试剂和材料、仪器设备、分析步骤、结果计算及精密度等。
本文件适用于酒醅中淀粉的测定。
是否包含专利
否
